转盘共聚焦成像系统是一种高分辨率、高灵敏度的显微成像技术，广泛应用于细胞生物学、组织学和材料科学等领域。为了获得高质量的成像结果，样品准备是关键步骤之一。以下是一些在转盘共聚焦成像系统中样品准备的技巧和要求。

一、样品固定与保存

对于生物样品，固定是保持细胞或组织结构完整性的重要步骤。常用的固定剂包括甲醛、乙醇等。甲醛能够较好地保留细胞和组织的结构，但可能会对某些抗原的检测产生影响，因此在后续的免疫染色中可能需要进行抗原修复。乙醇固定则适合于一些需要快速固定的样品，但可能会导致细胞收缩或变形。在固定后，样品需要妥善保存，通常保存在缓冲液中，避免长时间暴露在空气中，防止样品干燥或降解。

二、样品厚度与透明度

转盘共聚焦成像系统对样品的厚度有一定的要求。一般来说，样品厚度应控制在合适的范围内，通常在几微米到几十微米之间。过厚的样品可能会导致成像时焦平面的模糊或光散射增加，影响图像质量。对于较厚的组织切片，可以通过梯度脱水和透明化处理，使组织更加透明，减少光的散射和吸收，从而提高成像的分辨率和深度。透明化处理通常使用一些有机溶剂或特殊的透明化试剂，但需要注意这些试剂可能对荧光染料产生影响，因此需要在实验前进行优化。

三、荧光标记的优化

荧光标记是转盘共聚焦成像的核心环节。选择合适的荧光染料或荧光蛋白是关键。荧光染料应具有较高的亮度、良好的光稳定性和较低的背景荧光。在标记过程中，需要优化标记浓度和时间，以确保目标结构被充分标记，同时避免非特异性结合导致的背景荧光增加。例如，在免疫荧光染色中，需要选择高特异性的抗体，并优化抗体的稀释比例和孵育时间。对于活细胞成像，可以使用荧光蛋白标记细胞内的特定结构或蛋白质，但需要注意荧光蛋白的表达水平和对细胞生理功能的影响。

四、样品装载与定位

在将样品装载到成像系统中时，需要确保样品的平整和稳定。对于贴壁细胞，可以使用盖玻片或培养皿进行培养，并在成像前确保细胞贴壁良好，避免细胞漂浮或脱落。对于组织切片，可以将其固定在载玻片上，并使用封片剂进行封片，以防止样品干燥和荧光淬灭。在成像前，还需要对样品进行定位，确保目标区域位于成像视野内。一些成像系统配备了自动定位功能，可以通过预扫描快速找到目标区域，提高成像效率。

五、样品的环境控制

在成像过程中，样品的环境条件对成像结果也有重要影响。对于活细胞成像，需要维持细胞的生理条件，包括温度、湿度和二氧化碳浓度等。通常需要使用活细胞成像工作站或培养皿加热装置，以确保细胞在成像过程中保持活性。对于固定样品，虽然不需要维持生理条件，但需要注意避免样品暴露在强光下，防止荧光染料的光漂白。

样品准备是转盘共聚焦成像系统的关键环节。通过优化样品固定、厚度控制、荧光标记、装载和环境条件等步骤，可以显著提高成像质量，为后续的科学研究提供可靠的数据支持。

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